应用案例 | 中科睿极间充质干细胞无血清培养基：原传一体 性能稳定

    摘 要    

在再生医学领域，间充质干细胞（MSCs）因其多向分化潜能和免疫调节特性而备受关注。然而，传统的MSCs培养方法往往依赖于动物血清，影响了细胞培养的标准化、安全性和可重复性，导致其临床应用受限。

为了克服这些限制，中科睿极研发了无异源成分、批次稳定的DASEA^® Ultramedia^® Max 间充质干细胞无血清培养基，配合同样无异源的DASEA^® UltraTryple^® 重组温和消化酶，对脐带来源的MSCs进行原代和传代培养。

一、实验材料

脐带、DASEA^® Ultramedia^® Max 间充质干细胞无血清培养基、DASEA^® UltraTryple^® 重组温和消化酶、PBS。

二、实验方法

本次实验以一条长度22cm的新鲜脐带为例，从原代开始培养，在第13天收获后，使用T175培养瓶连续传代至P10，全程使用DASEA^® UltraTryple^® 重组温和消化酶进行消化处理。具体实验步骤见表1和表2。

表1 原代处理步骤

表2 连续传代参数

三、实验结果

· 原代收获细胞情况

在第7天前后可见组织块附近有细胞爬出，在第13天时收获原代细胞（图1），本次收获原代细胞共计1.56×10⁷ 个。

图1 原代细胞爬出

· T175培养瓶连续传代情况

对细胞进行连续传代培养至P10，每代使用UltraTryple^® 重组温和消化酶进行消化传代。细胞如图2所示，呈梭形、涡旋状排列；P6之前细胞增殖不低于10倍，细胞活率始终维持在97%以上（图3），细胞粒径在14-17um之间（图4）。

图2 MSC-P6细胞形态

图3 细胞增殖倍数和细胞活率变化  

图4 细胞粒径变化

对P10细胞进行流式检测，表明传代至P10，细胞表型正常（图5），体外致瘤性检测，表明Max培养的MSCs不具备形成肿瘤的能力（图6）。

图5 MSC-P10流式检测

图6 体外致瘤性检测（图左：MSC-P10，图右：K562）

上述实验表明DASEA^® Ultramedia^® Max 间充质干细胞无血清培养基可以进行脐带原代细胞培养，搭配UltraTryple^® 重组温和消化酶进行连续传代培养，能够长时间稳定维持细胞体外扩增速率和细胞表型。

总结：本实验验证中科睿极DASEA^® Ultramedia^® Max 间充质干细胞无血清培养基在促进MSCs体外扩增、维持细胞表型和功能方面的有效性，以及DASEA^® UltraTryple^® 重组温和消化酶消化细胞的安全性。通过精确控制实验条件，我们展示了一种高效、安全的MSCs培养策略，为细胞生物学研究和临床应用提供了更稳定更高质量的细胞培养途径。